当前位置:查字典地理网 >地理学习 >学习资料 >水中大肠杆菌群数的测定
粪便中存在大肠杆菌,故测定水中的大肠杆菌群数,可检验水体是否被粪便污染以及污染的程度。
本实验用发酵法测定大肠杆菌群数。依据原理是:大肠杆菌群在37摄氏度生长时使乳糖发酵,其产物在特定培养基上形成黑色化合物。统计染成黑色的菌群数,即可计算水中大肠杆菌群的数量。
工具与材料
高压蒸汽灭菌锅,恒温培养箱,生物显微镜(图3-1-21-1),载玻片,培养皿,移液管,抽滤瓶,布氏漏斗,醋酸纤维素滤膜,镊子,酒精灯,锥形瓶。
蛋白胨,乳糖,磷酸氢二钾,琼脂,2%伊红溶液, 0.5%美蓝溶液,5%盐酸溶液,5%氢氧化钠溶液。
活动过程
1.培养基的配制。
称取20克琼脂,加入到900毫升蒸馏水中,加热溶解,然后加入2克磷酸氢二钾、10克蛋白胨,搅拌使之充分混合,补充蒸馏水至1000毫升,用盐酸和氢氧化钠溶液调节pH值为7.2~7.4。再加入10克乳糖,混匀后分
装在250毫升的锥形瓶中,在121摄氏度的高温蒸汽灭菌锅内灭菌15分钟,贮于冷暗处备用。
2.灭菌。
将培养皿、漏斗、滤膜、抽滤瓶、吸管等放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌20分钟。
3.平板培养基的制作。
将贮备的培养基加热融化,用已灭菌的吸管加入5毫升伊红溶液和5毫升美蓝溶液,并充分混匀。立即将约15毫升培养基倾入已灭菌的空培养皿中,冷凝待用。
4.将布氏漏斗在抽滤瓶上固定好,用无菌镊子夹取醋酸纤维素滤膜边缘,粗糙面朝上,贴放在布氏漏斗上。
5.把采集的水样1000毫升倒入布氏漏斗中,将抽滤装置(图3-1-21-2)中的缓冲瓶连上抽气装置,进行抽滤。
6.抽滤结束后,用镊子将附有细菌的滤膜小心取出,放在培养皿中的培养基上,使滤膜与培养基完全紧贴。
7.将培养皿置于37摄氏度恒温箱内培养24小时,取出后统计培养基上呈黑色的菌群数,填入表3-1-21-1。
说明与延伸
1.整个实验过程必须在无菌状态下操作。
2.培养基的配制可预先由实验室完成,学生可不做这一部分。
表3-1-21-1 水体大肠杆菌群数测定报告
3.每个培养皿内以出现30~300个菌群为准,若超过300个,水样应进行稀释。结果应以统计出的菌群数乘以稀释倍数。
4.采集水样时采样容器必须充分灭菌。
5.国家标准规定,饮用水中总大肠杆菌群必须小于10000个/升。观察自来水是否达到饮用水标准。
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